人参皂甙Rg3对正常和缺氧条件下人视网膜血管内皮细胞的作用

摘要：目的 观察正常和缺氧条件下人参皂甙Rg3对人视网膜血管内皮细胞(HRCEC)增生、迁徙和管腔形成的影响.方法 在正常条件的培养基中,分别加入0.0、0.1、0.5 mmol/L的人参皂甙Rg3,依序分为A、B、C3个组；在150 μmol/L 氯化钴缺氧条件的培养基中,分别加入0.0、0.1、0.5 mmol/L的人参皂甙Rg3,依序分为D、E、F3个组.在培养后24、48、72 h用噻唑蓝比色法检测HRCEC的增生；在24 h,用Transwell小室检测细胞迁徙,用基质胶检测细胞管腔形成,实时荧光定量逆转录酶链聚合反应和蛋白质免疫印迹法检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白质表达.结果 正常或缺氧条件培养基中,均可观察到人参皂甙Rg3对HRCEC增生的抑制作用,并且这种抑制作用呈浓度与时间依赖性(F正常组浓度=30.331,F缺氧组浓度=33.402,F正常组时间=85.462,F缺氧组时间=136.045,P均＜0.05).Transwell小室结果显示,A、B、C、D、E、F组HRCEC细胞的移行细胞数分别为(103.33±3.54)、(92.25±3.68)、(78.64±4.66)、(125.76±3.11)、(90.27±3.55)、(77.81±5.01)个.正常和缺氧条件下各组间HRCEC细胞的移行细胞数比较,差异有统计学意义(F正常组组间=28.801,F缺氧组组间=117.594,P均＜0.05).基质胶检测结果显示,A、B、C、D、E、F组HRCEC细胞的完整管腔形成数分别为(24.3±2.2)、(15.7±1.7)、(10.1±2.3)、(26.2±1.9)、(15.1±2.6)、(8.6±1.9)个.正常和缺氧条件下各组间HRCEC细胞的完整管腔形成数比较,差异有统计学意义(F正常组组间=35.364,F缺氧组组间=50.989,P均＜0.05).实时荧光定量逆转录-酶链聚合反应检测结果显示,A、B、C、D、E、F组HRCEC细胞的VEGF mRNA相对表达量分别为1.00±0.06、0.79±0.06、0.68±0.02、3.88±0.12、2.83±0.09、1.15±0.05.正常和缺氧条件下各组间HRCEC细胞的VEGF mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义(F正常组组间=31.303,F缺氧组组间=682.668,P均＜0.05).蛋白质免疫印迹法检测结果显示,A、B、C、D、E、F组HRCEC细胞的VEGF蛋白质相对表达量分别为0.62±0.03、0.41±0.02、0.32±0.02、0.91±0.03、0.82±0.03、0.71±0.02.正常和缺氧条件下各组间HRCEC细胞的VEGF蛋白质相对表达量比较,差异有统计学意义(F正常组组间=125.471,F缺氧组组间=41.045,P均＜0.05).结论 人参皂甙Rg3可通过抑制HRCEC细胞增生、迁徙和管腔形成来抑制新生血管的形成,其机制可能通过抑制VEGF的表达来实现.